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Apr 03, 2024

Diagnóstico de tuberculose geniturinária: detecção de lipoarabinomanano micobacteriano e MPT

Scientific Reports volume 13, Artigo número: 11560 (2023) Citar este artigo 405 Acessos 1 Detalhes da Altmetric Metrics Detectamos um coquetel de Mycobacterium tuberculosis lipoarabinomannan (LAM) e

Scientific Reports volume 13, Artigo número: 11560 (2023) Citar este artigo

405 Acessos

1 Altmétrico

Detalhes das métricas

Detectamos um coquetel de biomarcadores Mycobacterium tuberculosis lipoarabinomanano (LAM) e MPT-64 nas vesículas extracelulares (EVs) da urina de pacientes com TB geniturinária (GUTB) por ensaio de imuno-PCR baseado em nano (I-PCR), ou seja, acoplado a esfera magnética I-PCR baseado em nanopartículas de ouro (MB-AuNP-I-PCR) e comparou os resultados com I-PCR e Magneto-ELISA. O(s) tamanho(s) dos EVs da urina variaram entre 52,6 e 220,4 nm, conforme analisado por microscopia eletrônica de transmissão (TEM) e análise de rastreamento de nanopartículas. AuNPs funcionalizados (acoplados com anticorpos/oligonucleotídeos de detecção) foram caracterizados por espectroscopia UV-vis, TEM, ELISA, PCR, Microscopia de Força Atômica e espectroscopia de Infravermelho por Transformada de Fourier, enquanto a conjugação de anticorpos de captura com MBs foi validada por espectroscopia UV-vis e Magneto- ELISA. Nosso MB-AuNP-I-PCR exibiu sensibilidades de 85% e 87,2% em casos clinicamente suspeitos (n = 40) e totais (n = 47) de GUTB, respectivamente, com especificidade de 97,1% em controles não-TB (n = 35) . Estes resultados foram ainda autenticados pelo I-PCR quantitativo SYBR Green MB-AuNP-real-time (MB-AuNP-RT-I-PCR). Ao mesmo tempo, o I-PCR e o Magneto-ELISA mostraram sensibilidades de 68,1% e 61,7%, respectivamente, no total de casos de GUTB, que foram significativamente menores (p <0,05–0,01) do que o MB-AuNP-I-PCR. Marcadamente, uma ampla faixa (400 fg/mL – 11 ng/mL) de LAM + MPT-64 foi quantificada em EVs de urina de casos de GUTB pelo SYBR Green MB-AuNP-RT-I-PCR, que pode avaliar a dinâmica da doença. Este estudo certamente irá melhorar os algoritmos atuais utilizados no diagnóstico do GUTB.

Antes da pandemia de COVID-19, a tuberculose (TB) era a principal causa de mortes por um único agente infeccioso, ficando acima do VIH/SIDA, mas agora, a TB é a segunda causa de morte infecciosa depois da COVID-191. Em 2021, foram notificadas aproximadamente 1,4 milhões e 0,19 milhões de mortes entre indivíduos infectados com TB VIH-negativos e VIH-positivos, respectivamente1. A pandemia de COVID-19 teve um impacto negativo no acesso ao diagnóstico e tratamento da TB e na carga global da TB1. Em 2021, a Índia foi responsável pela maior carga de TB (28%), seguida pela Indonésia (9,2%) e China (7,4%)1.A TB geniturinária (GUTB) é a segunda forma de TB extrapulmonar (EPTB) mais notificada nos países em desenvolvimento como a Índia e a terceira forma disseminada em países de baixa endemia2. As apresentações clínicas incomuns, a localização da doença em locais anatômicos variados e a natureza paucibacilar das amostras tornam o diagnóstico de GUTB masculino/feminino um desafio consternado. Para reduzir a morbidade/mortalidade associada à GUTB, é necessário um diagnóstico imediato e preciso. Nos países em desenvolvimento, a baciloscopia é amplamente utilizada, mas carece de sensibilidade e reprodutibilidade3. Embora a identificação por cultura de Mycobacterium tuberculosis (Mtb) a partir de biópsias endometriais (EBs)/amostras de urina de casos de GUTB seja considerada o padrão ouro/de referência, ela geralmente exibe baixa sensibilidade em meio Lowenstein-Jensen (LJ) devido à escassa carga bacteriana dentro eles4,5. Entretanto, tem um longo tempo de resposta de 4 a 6 semanas e necessita da experiência de técnicos qualificados5. O exame histopatológico (HPE) é uma técnica importante para diagnosticar GUTB5, embora o HPE não seja patognomônico, exceto pela presença de bactérias álcool-ácido resistentes (BAAR), uma vez que não consegue diferenciar entre GUTB e outras doenças granulomatosas6,7. Notavelmente, a ultrassonografia, a tomografia computadorizada e a urografia intravenosa são as principais modalidades de imagem empregadas para o diagnóstico de GUTB masculina/feminina, enquanto a laparoscopia e a histerossalpingografia são usadas principalmente no diagnóstico de GUTB feminina4,8, mas nenhuma técnica de imagem por si só é adequada para o diagnóstico definitivo.

É digno de nota que é tedioso coletar amostras de GUTB, por exemplo, biópsias de próstata/renal e EBs, uma vez que envolvem um procedimento invasivo rigoroso, valeria a pena explorar amostras facilmente acessíveis, como urina, plasma/soro, etc.4, 6. A principal vantagem da coleta de urina em relação a outros biofluidos é que ela está facilmente disponível em grandes quantidades e é obtida de maneira não invasiva9. No entanto, a concentração de vários biomarcadores e constituintes bioquímicos é bastante variável na urina e de natureza dinâmica devido à diferente ingestão de líquidos, horário de coleta da amostra, idade e diferentes estados de saúde dos indivíduos9.